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ANTI-D
MONOCLONAL
Determinación
del fenotipo RH
El fenotipo Rh junto con el ABO, es de importancia
crucial para la transfusión de sangre. Hemos
tomado nota de los problemas que presenta en la práctica
su determinación, habida cuenta de las múltiples
recomendaciones que debe dar el fabricante de los
reactivos anti-D para disminuir los riesgos de determinaciones
erróneas con los métodos sobre láminas.
La definición de un D débil (Du) es
solo necesario en donantes de sangre, no en receptores.
Un receptor D ´débil´ será
siempre un Rh negativo. Por esta razón les
presentamos un reactivo anti-D monoclonal salino muy
potente, que reacciona en condiciones usuales y muy
simples como se describe más adelante. De esta
forma se evitan varios inconvenientes importantes:
* No es necesario disponer de fuente de calor para
láminas
* No se presentarán casos dudosos o de falsos
positivos por desecación de la mezcla hematíes-reactivo
* Todo muestra negativa será un verdadero D
débil si resultare posteriormente positivo
en la prueba de Coombs.
Composición
Este reactivo es producido a partir de sobrenadantes
de cultivo de la líneas celulares híbridas
, que secretan anticuerpos aglutinantes específicos
contra el antígeno D. El anticuerpo monoclonal
IgM aglutina eritrocitos D positivos en medio salino
a temperatura ambiente. Preservativo: Acida sódica
1 mg/ml
Almacenamiento y duración
Almacenar entre 2-8 ºC bien tapado. Bajo estas
condiciones el reactivo puede ser usado hasta la fecha
indicada en la etiqueta.
Area de aplicación
Detección del antígeno D en medio salino.
No es necesario añadir ninguna solución
potenciadora de la aglutinación, ni incubar
ó calentar los reactantes. Puede emplearse
sangre nativa ó anticoagulada.
Métodos
4. Prueba rápida sobre láminas
4.1. Mezclar sobre una lámina (portaobjeto)
una gota (aprox. 50 Ml) del reactivo con una gota
de sedimento de hematíes ó sangre.
4.2. Disgregar la mezcla sobre un área de 1-2
cm de diámetro.
4.3. Observar la presencia ó no de aglutinación
dentro de un tiempo máximo de 2 min. realizando
movimientos de báscula. En donantes de sangre
aplicar prueba en tubos si el resultado es negativo
o dudoso.
5. Prueba en placas
5.1. Haga una suspensión de hematíes
al 5-10% in solución salina isotónica.
5.2. Mezcle una gota de reactivo con una gota de la
suspensión de hematíes problema en cada
hoyuelo.
5.3. Incube 5-10 min. a temperatura ambiente (aprox.
22 ºC) preferiblemente en cámara húmeda
para evitar la desecación.
5.4. Leer la prueba aplicando leves movimientos de
rotación a la placa. En donantes de sangre
aplicar prueba en tubos si el resultado es negativo
ó dudoso.
6. Prueba en tubos
6.1. Haga una suspensión de hematíes
al 3-5% en solución salina isotónica.
6.2. Mezclar una gota del reactivo con una gota de
la suspensión de hematíes.
6.3. Centrifugue de inmediato a .......g durante un
minuto. Realizar la lectura mediante la liberación
del botón golpeando suavemente el tubo con
los dedos.
6.4. Si el resultado es débilmente positivo
ó dudoso se recomienda incubar el tubo 15-20
min. a temperatura ambiente (aprox. 22 ºC), centrifugar
nuevamente y volver a evaluar la aglutinación.
Nota
Los donantes que resultan negativos deben ser chequeados
mediante la prueba de Coombs para D débil empleando
un anti-D incompleto mono ó policlonal (componente
anti-D de clase IgG): Método como en la Prueba
Indirecta de Coombs: Después del paso 6.4 incubar
adicionalmente durante 20 min. a 37ºC, lavar
tres veces con SSF, añadir 2 gotas del reactivo
de Coombs poliespecífico, centrifugar y leer.
En general suelen ser reacciones débiles por
lo que es aconsejable siempre montar un control negativo.
Esto equivale a realizarle una prueba directa de Coombs
a los hematíes del donante.
ANTI-CDE
Usese según los métodos descritos para
el anti-D para verificar la ausencia de los antígenos
C y E en donantes Rh (D) negativos. De ser positiva
la prueba el donante será declarado Rh positivo
(como donante).
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